การจำแนกคุณลักษณะของเอนไซม์ทริปซินที่ผ่านการตรึงจากเครื่องในปลากะพง

Main Article Content

ธัญชนก พูนศิลป์
Atlanta M. Barman
Benjamin K. Simpson
สรรพสิทธิ์ กล่อมเกล้า

บทคัดย่อ

เอนไซม์ทริปซินที่ผ่านการทำบริสุทธิ์บางส่วนจากเครื่องในปลากะพงสามารถถูกตรึงบน Octyl Sepharose CL-4B เอนไซม์ทริปซินตรึงรูปมีอุณหภูมิและพีเอชที่เหมาะสมสาหรับการย่อยสลาย Nα-benzoyl-DL-arginine-p-nitroanilide (DL-BAPNA) เท่ากับ 55 องศาเซลเซียสและ 8 ตามลาดับ เอนไซม์ทริปซินตรึงรูปแสดงกิจกรรมและความคงตัวต่อพีเอช (พีเอช 6-11) อุณหภูมื (20-80 องศาเซลซียส) ในช่วงกว้างกว่าเมื่อเปรียบเทียบกับเอนไซม์ในรูปอิสระ เอนไซม์ตรึงรูปมีความไวลดลงต่อสารยับยั้งเอนไซม์ทริปซินจากถั่วเหลืองสอดคล้องกับผลการทดลองพบว่า เอนไซม์ตรึงรูปและเอนไซม์ในรูปอิสระคงกิจกรรมร้อยละ 70.59 และ 20.10 ตามลำดับ เมื่อบ่มด้วยสารยับยั้งเอนไซม์ทริปซินจากถั่วเหลืองที่ระดับความเข้มข้น 1 ไมโครโมลาร์ สำหรับการศึกษาการนำเอนไซม์กลับมาใช้ได้ใหม่พบว่า เอนไซม์ทริปซินตรึงรูปยังคงมีกิจกรรมร้อยละ 41.31 หลังจากผ่านการนำไปใช้ 6 ครั้ง แสดงว่าเอนไซม์ทริปซินตรึงรูปมีความคงตังและสามารถนำกลับมาใช้ใหม่ได้

Article Details

How to Cite
[1]
พูนศิลป์ ธ., M. Barman, A. , K. Simpson, B. และ กล่อมเกล้า ส. 2020. การจำแนกคุณลักษณะของเอนไซม์ทริปซินที่ผ่านการตรึงจากเครื่องในปลากะพง. วารสารการพัฒนาชุมชนและคุณภาพชีวิต. 8, 3 (ส.ค. 2020), 530–543.
บท
บทความวิจัย

References

Aryee, A.N.A. and B.K. Simpson. 2012. Immobilization of lipase from grey mullet. Applied Biochemistry and Biotechnology 168(8): 2105-2122.
Atacan, K., B. Çakıroglu and M. Ozacar. 2017. Covalent immobilization of trypsin onto modified magnetite nanoparticles and its application for casein digestion. International Journal of Biological Macromolecules 97: 148-155.
Azevedo, R.D.S., I.P.G. Amaral, A.C.M. Ferreira, T.S. Espósito and R.S. Bezerra. 2018. Use of fish trypsin immobilized onto magnetic-chitosan composite as a new tool to detect antinutrients in aquafeeds. Food Chemistry 257: 302-309.
Bassan, J.C., T.M. de Souza Bezerra, G. Peixoto, C.Z.P. da Cruz, J.P.M. Galan, A.B.D.S. Vaz, S.S. Garrido, M. Filice and R. Monti. 2016. Immobilization of trypsin in lignocellulosic waste material to produce peptides with bioactive potential from whey protein. Materials 9(5): 357. Doi: 10.3390/ma9050357.
Bayramoglu, G., M. Yılmaz, A.U. Şenel and M.Y. Arıca. 2008. Preparation of nanofibrous polymer grafted magnetic poly(GMA-MMA)-g-MAA beads for immobilization of trypsin via adsorption. Biochemical Engineering Journal 40(2): 262-274.
Bougatef, A. 2013. Trypsins from fish processing waste: characteristics and biotechnological applications-comprehensive review. Journal of Cleaner Production 57: 257-265.
Erlanger, B.F., N. Kokowsky and W. Cohen. 1961. The preparation and properties of two new chromogenic substrates of trypsin. Archives of Biochemistry and Biophysics 95(2): 271-278.
Ganachaud, C., D. Bernin, D. Isaksson and K. Holmberg. 2013. An anomalous behavior of trypsin immobilized in alginate network. Applied Microbiology and Biotechnology 97(10): 4403-4414.
Garcia-Galan, C., A. Berenguer-Murcia, R. Fernandez-Lafuente and R.C. Rodrigues. 2011. Potential of different enzyme immobilization strategies to improve enzyme performance. Advanced Synthesis and Catalysis 353(16): 2885-2904.
Kang, K., C. Kan, A. Yeung and D. Liu. 2005. The properties of covalently immobilized trypsin on soap-free P(MMA-EA-AA) latex particles. Macromolecular Bioscience 5(4): 344–351.
Klomklao, S., S. Benjakul, W. Visessanguan, H. Kishimura and B.K. Simpson. 2007. Trypsin from pyloric caeca of bluefish (Pomatomus saltatrix). Comparative Biochemistry and Physiology B 148(4): 382-389.
Koide, T. and T. Ikenaka. 1973. Studies on soybean trypsin inhibitors: 1. Fragmentation of soybean trypsin inhibitor (Kunitz) by limited prateolysis and by chemical cleavage. European Journal of Biochemistry 32(3): 401-407.
Lage, F.A.P., J.J. Bassi, M.C. Corradini, L.M. Todero, J.H. Luiz and A.A. Mendes. 2016. Preparation of a biocatalyst via physical adsorption of lipase from Thermomyces lanuginosus on hydrophobic support to catalyze biolubricant synthesis by esterification reaction in a solvent-free system, Enzyme and Microbial Technology 84: 56-67.
Li D., N.A. Ackaah-Gyasi and B.K. Simpson. 2013. Immobilization of bovine trypsin onto controlled pore glass. Journal of Food Biochemistry 38(2): 184-195.
Purcena, L.L.A., S.S. Caramori, S. Mitidieri and K.F. Fernandes. 2009. The immobilization of trypsin onto polyaniline for protein digestion. Materials Science and Engineering: C 29(4): 1077-1081.
Seabra, I.J. and M.H. Gil. 2007. Cotton gauze bandage: A support for protease immobilization for use in biomedical applications. Revista Brasileira de Ciências Farmacêuticas 43(4): 535-542.
Sears, P.S. and D.S. Clark. 1993. Comparison of soluble and immobilized trypsin kinetics: Implications for peptide synthesis. Biotechnology and Bioengineering 42(1): 118-124.
Shtelzer, S., S. Rappoport, D. Avnir, M. Ottolenghi and S. Braun. 1992. Properties of trypsin and of acid phosphatase immobilized in sol-gel glass matrices. Biotechnology and Applied Biochemistry 15(3): 227-235.
Simpson, B.K. 2000. Digestive proteinases from marine animals. pp. 531-540. In: N.F. Haard and B.K. Simpson (eds). Seafood Enzymes: Utilization and Influence on Postharvest Seafood Quality. Marcel Dekker, New York.
Steel, R.G.D. and J.H. Torrie. 1980. Principles and Procedures of Statistics: A Biometrical Approach. McGraw-Hill, New York.
Sun, X., Cai X., R.Q. Wang and J. Xiao. 2015. Immobilized trypsin on hydrophobic cellulose decorated nanoparticles shows good stability and reusability for protein digestion. Analytical Biochemistry 477: 21-27.
Vidinha, P., V. Augusto, M. Almeida, I. Fonseca, A. Fidalgo, L. Ilharco, J.M. Cabral and S. Barreiros. 2006. Sol-gel encapsulation: an efficient and versatile immobilization technique for cutinase in non-aqueous media. Journal of Biotechnology 121(1): 23-33.
Wu, N., S. Wang, Y. Yang, J. Song, P. Su and Y. Yang. 2018. DNA-directed trypsin immobilization on a polyamidoamine dendrimer-modified capillary to form a renewable immobilized enzyme microreactor. International Journal of Biological Macromolecules 113(1): 38-44.
Wu, S., B. Liu and S. Li. 2005. Behaviors of enzyme immobilization onto functional microspheres. International Journal of Biological Macromolecules 37(5): 263-267.